通用名称

非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒

试剂盒用途

非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的非洲猪瘟病毒特异性抗体，用于猪的血清学诊断。

试剂盒原理

本试剂盒采用间接ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的非洲猪瘟病毒抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有非洲猪瘟特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶结合物，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔板中加入显色液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度OD值。

贮藏与有效期

2~8℃避光保存，有效期为 12个月。

规格

192 T/盒

试剂盒组分

需自备的材料

微量移液器、量筒、酶标仪（450nm）、去离子水、离心机（4000rpm）、恒温培养箱（37℃）、计时器等。

操作方法

一、试剂配制

洗涤工作液：使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（20~25℃） ，并摇动，使沉淀溶解（最好在37℃恒温培养箱中加热5~10 min），然后用蒸馏水作25倍稀释（例如：30ml的浓缩洗涤液加上720ml 蒸馏水）混匀，稀释好的洗涤液2~8℃可存放7日。

二、样品处理

1. 取动物全血，待血液凝固后，4000rpm离心10min，收集上清。也可自然凝固析出血清，无溶血。

2. 在血清稀释板中按1:100稀释待检血清样本，充分混匀。

注：阴、阳性对照不用稀释。

三、操作步骤

1. 取包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl 加至抗原包被板中。同时设阴性对照2孔、阳性对照2孔，取阴性、阳性对照各100μl 分别加入反应孔中，轻轻振匀孔中样本，盖上盖板膜，37℃温育30min。

2. 弃去孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液300μl，静置30s后，弃去洗涤液。洗涤3次后在吸水纸上拍干（必须充分拍干）。

3. 配制酶结合物工作液：按1:100 （1份酶结合物浓缩液+99份酶结合物稀释液）混匀。

4. 每孔加酶结合物工作液100μl，盖上盖板膜，37℃温育30min。

5. 弃去孔中的溶液，洗涤3次，方法同2。

6. 底物A液与底物B液按1:1混合均匀，加入孔中，100μl/孔，盖上盖板膜，37℃反应10 min。

7. 每孔加入终止液50μl，5min内测定结果。

结果判定

在酶标仪上测各孔OD450nm值。

1. 试验成立的条件：

阳性对照孔平均OD450nm值≥1.0，且阴性对照孔平均OD50nm值<0.2，试验结果才有效；否则，应进行重复试验。

2. 结果计算： 

S/P=（样本OD450nm 值-阴性对照平均OD450nm 值）/（阳性对照平均OD450nm 值-阴性对照平均OD450nm 值）

3. 阴阳性判断：

S/P≥0.2，判为阳性；S/P<0.1，判为阴性；0.1≤S/P<0.2，判为可疑。

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温（至少40 min），使用后放回2~8℃保存。

2. 不同批号的试剂盒组份不得混用，不同试剂使用时应防止交叉污染。

3. 底物液不能暴露于强光或接触氧化剂。

4. 必须使用符合药典规定的水（如蒸馏水、去离子水或纯水）稀释洗涤液。

5. 待检血清数量较多时，应先稀释完所有待检血清后，再加到酶标板上，使反应时间一致。

6. 终止液为强酸，若不慎溅到皮肤上请立即清洗。

7. 移液时，应尽量准确，防止产生气泡。

8. 应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。