主要成分与含量

作用与用途

用于酶联免疫吸附试验，检测犬血清中的抗狂犬病毒IgG抗体。

用法与判定

1  需要自备的材料

1.1  去离子水或生理盐水

1.2  可调移液器

1.3  1000ml的量筒

1.4  酶标仪

1.5  37℃温箱

2  预备步骤

2.1  血清灭活  将待检样品预先在56℃水浴中30分钟进行热灭活处理。

2.2  温度平衡  实验前将试剂盒从2～8℃冰箱取出，置室温平衡30分钟以上。

2.3  版面布置  做好质控阳性、质控阴性血清和待检样品的版面布置记录。

2.4  质控阳性血清、质控阴性血清的稀释  

用0.5ml样品稀释液复溶质控阳性血清和质控阴性血清，并作10倍系列稀释至1:100。

2.5  待检血清稀释  将待检血清10倍系列稀释至1:100。

3  检测步骤

3.1  加样  将1:100稀释的质控阳性血清、质控阴性血清和待检样品按照版面布置加入板孔内，100μl/孔，均作2孔重复。

3.2  孵育  将酶标板置于37℃恒温培养箱内，孵育30分钟。

3.3  洗板  用纯化水将浓缩洗涤液进行20倍稀释备用，弃掉板孔内液体，加洗涤液200μl/孔，洗涤5次，甩干。

3.4  加酶标抗体  用酶标抗体稀释液按照1：100稀释酶标抗体，100μl/孔。

3.5  孵育  将酶标板置于37℃恒温培养箱内，孵育60分钟。

3.6  洗板  弃掉孔内液体，加洗涤液200μl/孔，洗涤5次，甩干。

3.7  显色  底物A、B液等体积混合，每孔加100ul。

3.8  孵育  将酶标板置于37℃恒温培养箱内，避光孵育20min。

3.9  终止  每孔加终止液50μl，5分钟内测定结果。

3.10  检测  用酶标仪测定并记录各孔在450nm波长处的吸光度（OD450nm）值。

4  结果判定

4.1  测有效性  当质控阳性血清OD450nm值≥0.6，质控阴性血清OD450nm值≤0.1，试验有效。

4.2  检测结果判定  待检样品OD450nm值≥质控阳性血清OD450nm值，认为待检样品血清抗体达到保护水平（0.5IU/ml），待检样品OD450nm值＜质控阳性OD450nm值，则认为待检样品血清抗体未达到保护水平（0.5IU/ml）。

注意事项

(1) 本试剂盒仅用于检测犬血清中狂犬病毒IgG抗体。

(2) 不要使用过了有效期的试剂，不同批次试剂盒的成分不要混用。

(3) 所有试剂2～8℃储存，使用前所有的试剂需平衡至室温。

(4) 所有的试剂避免接触皮肤和眼睛，如果碰到，立即用冷水冲洗接触处。

(5) 在样品采集，储存和运输过程中避免污染。

(6) 避免溶液被金属离子、氧化剂和清洁剂污染，每个容器一定要清洁，对酶标记物和底物不要使用同一个容器和吸头。

(7) 检测样品预先进行热灭活（56℃、30min），建议样品在-20℃条件下保存。操作过程中的移液、时间和洗涤都必须精确控制。

(8) 试剂盒开封后未用完的试剂盒，质控阴性和阳性血清应-20℃以下冻存，其余试剂应2～8℃保存，ELISA板条密封条件下2～8℃保存，可于1个月内用完。

规格

96孔/盒

贮藏与有效期

2~8℃保存，有效期为12个月。